01 概念
      分光光度計(jì)，又稱光譜儀(spectrometer)，是將成分復(fù)雜的光，分解為光譜線的科學(xué)儀器。測(cè)量范圍一般包括波長(zhǎng)范圍為400~760 nm的可見(jiàn)光區(qū)和波長(zhǎng)范圍為200～400 nm的紫外光區(qū).不同的光源都有其特有的發(fā)射光譜,因此可采用不同的發(fā)光體作為儀器的光源.
      分光光度法是根據(jù)物質(zhì)的吸收光譜和光的吸收定律，對(duì)物質(zhì)進(jìn)行定量、定性分析的一種儀器分析方法。根據(jù)測(cè)定時(shí)所選用的光源分為：
      可見(jiàn)分光光度法(400~800nm)
      紫外分光光度法(200~400 nm)
      紅外分光光度法(800nm~50mm)
      02 原理
      分光光度計(jì)采用一個(gè)可以產(chǎn)生多個(gè)波長(zhǎng)的光源，通過(guò)系列分光裝置，從而產(chǎn)生特定波長(zhǎng)的光源，光線透過(guò)測(cè)試的樣品后，部分光線被吸收，計(jì)算樣品的吸光值，從而轉(zhuǎn)化成樣品的濃度。
      Lambert-Beer定律是吸收光度法的基本定律，表示物質(zhì)對(duì)某一單色光吸收的強(qiáng)弱與吸光物質(zhì)濃度和厚度間的關(guān)系。
      I——入射的單色光強(qiáng)度
      I——透射的單色光強(qiáng)度
      c——樣品濃度
      L——光程，即盛放溶液的液槽的透光厚度
      k——光被吸收的比例系數(shù)
      當(dāng)濃度采用摩爾濃度時(shí)，k為摩爾吸收系數(shù)。它與吸收物質(zhì)的性質(zhì)及入射光的波長(zhǎng)λ有關(guān)。
      當(dāng)一束平行單色光垂直通過(guò)某一均勻非散射的吸光物質(zhì)時(shí), 其吸光度與吸光物質(zhì)的濃度c及吸收層厚度L成正比。
      物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收波長(zhǎng)，以及相應(yīng)的吸收系數(shù)是該物質(zhì)的物理常數(shù)。當(dāng)已知某純物質(zhì)在一 定條件下的吸收系數(shù)后可用同樣條件將該供試品配成溶液，測(cè)定其吸收度，即可由上式計(jì)算出供試品中該物質(zhì)的含量。
      03 分類
      按波長(zhǎng)分為：
      1、可見(jiàn)光分光光度計(jì)：測(cè)定波長(zhǎng)范圍為400～760nm的可見(jiàn)光區(qū)；
      2、紫外分光光度計(jì)：測(cè)定波長(zhǎng)范圍為200～400nm的紫外光區(qū)；
      3、紅外分光光度計(jì)：測(cè)定波長(zhǎng)范圍為大于760nm的紅外光區(qū)；
      4、熒光分光光度計(jì)：用于掃描液相熒光標(biāo)記物所發(fā)出的熒光光譜；
      5、原子吸收分光光度計(jì)：光源發(fā)出被測(cè)的特征光譜輻射，被經(jīng)過(guò)原子化器后的樣品蒸氣中的待測(cè)元素基態(tài)原子所吸收，通過(guò)測(cè)定特征輻射被吸收的大小，來(lái)求出被測(cè)元素的含量。
      紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(200-1000nm)是目前市面上比較流行的，紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)根據(jù)光路可劃分為：?jiǎn)喂馐止夤舛扔?jì)、雙光束分光光度計(jì)、雙波長(zhǎng)分光光度計(jì)。
      04 主要部件
      1、光源：發(fā)出所需波長(zhǎng)范圍內(nèi)的連續(xù)光譜，有足夠的光強(qiáng)度。
      a 可見(jiàn)光區(qū)：鎢燈，碘鎢燈(3202500nm)
      b 紫外區(qū)：氫燈，氘燈(180～375nm)
      2、單色器：將光源發(fā)出的連續(xù)光譜分解為單色光的裝置。
      3、棱鏡:玻璃350～3200nm,石英185～4000nm
      4、光柵:波長(zhǎng)范圍寬,色散均勻,分辨性能好,使用方便。
      5、吸收池：(比色皿)用于盛待測(cè)及參比溶液。
      a 可見(jiàn)光區(qū)：光學(xué)玻璃池
      b 紫外區(qū)：石英池
      6、檢測(cè)器：利用光電效應(yīng)，將光能轉(zhuǎn)換成電流信號(hào)。光電池，光電管，光電倍增管。
      7、指示器：
      a 低檔儀器：刻度顯示
      b 中高 檔儀器：數(shù)字顯示，自動(dòng)掃描記錄
      05 分光光度計(jì)使用方法與步驟
      1)預(yù)熱儀器。為使測(cè)定穩(wěn)定，將電源開關(guān)打開，使儀器預(yù)熱20min，為了防止光電管疲勞，不要連續(xù)光照。預(yù)熱儀器時(shí)和在不測(cè)定時(shí)應(yīng)將比色皿暗箱蓋打開，使光路切斷。
      2)選定波長(zhǎng)。根據(jù)要求，轉(zhuǎn)動(dòng)波長(zhǎng)調(diào)節(jié)器，使指針指示所需要的單色光波長(zhǎng)。
      3)固定靈敏度檔。根據(jù)有色溶液對(duì)光的吸收情況，為使吸光度讀數(shù)為0.2-0.7，選擇合適的靈敏度。為此，旋動(dòng)靈敏度檔，使其固定于某一檔，在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中不再變動(dòng)。一般測(cè)量固定在“1”檔。
      4)調(diào)節(jié)“0”點(diǎn)。輕輕旋動(dòng)調(diào)“0”電位器，使讀數(shù)表頭指針恰好位于透光度為“0”處(此時(shí)，比色皿暗箱蓋是打開的，光路被切斷，光電管不受光照)。
      5)調(diào)節(jié)T=100 %。將盛蒸餾水(或空白溶液或純?nèi)軇?的比色皿放入比色皿座架中的格內(nèi)，有色溶液放在其它格內(nèi)，把比色皿暗箱蓋子輕輕蓋上，轉(zhuǎn)動(dòng)光量調(diào)節(jié)器，使透光度T=100 %，即表頭指針恰好指在T=100 %處。
      6)測(cè)定。輕輕拉動(dòng)比色皿座架拉桿，使有色溶液進(jìn)入光路，此時(shí)表頭指針?biāo)緸樵撚猩芤旱奈舛華。讀數(shù)后，打開比色皿暗箱蓋。
      7)關(guān)機(jī)。實(shí)驗(yàn)完畢，切斷電源，將比色皿取出洗凈，并將比色皿座架及暗箱用軟紙擦凈。
      06 分光光度計(jì)操作使用過(guò)程中的注意事項(xiàng)
      1)為了防止光電管疲勞。不測(cè)定時(shí)必 須將比色皿暗箱蓋打開，使光路切斷，以延長(zhǎng)光電管使用壽命。
      2)比色皿的使用方法：
      ①拿比色皿時(shí)，手指只能捏住比色皿的毛玻璃面，不要碰比色皿的透光面，以免沾污。
      ②清洗比色皿時(shí)，一般先用水沖洗，再用蒸餾水洗凈。如比色皿被有機(jī)物沾污，可用鹽酸-乙醇混合洗滌液(1∶2)浸泡片刻，再用水沖洗。不能用堿溶液或氧化性強(qiáng)的洗滌液洗比色皿，以免損壞。也不能用毛刷清洗比色皿，以免損傷它的透光面。
      每次做完實(shí)驗(yàn)時(shí)，應(yīng)立即洗凈比色皿。
      ③比色皿外壁的水用擦鏡紙或細(xì)軟的吸水紙吸干，以保護(hù)透光面。
      ④測(cè)定有色溶液吸光度時(shí)，一 定要用有色溶液洗比色皿內(nèi)壁幾次，以免改變有色溶液的濃度。另外，在測(cè)定一系列溶液的吸光度時(shí)，通常都按由稀到濃的順序測(cè)定，以減小測(cè)量誤差。
      ⑤在實(shí)際分析工作中，通常根據(jù)溶液濃度的不同，選用液槽厚度不同的比色皿，使溶液的吸光度控制在0.2～0.7。
      07 分光光度計(jì)分操作中容易出現(xiàn)的幾個(gè)典型故障及其排除方法
      1）儀器不能調(diào)零。可能原因:
      ①光門不能*關(guān)閉。解決方法:修 復(fù)光門部件，使其關(guān)閉。
      ②透過(guò)率"100 %"旋到底了。解決方法:重新調(diào)整"100 %"旋鈕。
      ③儀器嚴(yán)重受潮。解決方法:可打開光電管暗盒，用電吹風(fēng)吹上一會(huì)兒使其干燥，并更換干燥劑。
      ④電路故障。解決方法:送修理部門，檢修電路。
      2)儀器不能調(diào)"100 %"?？赡茉?
      ①光能量不夠。解決方法:增加靈敏度倍率檔位，或更換光源燈(盡管燈還亮)。
      ②比色皿架未落位。解決方法:調(diào)整比色皿架使其落位。
      ③光電轉(zhuǎn)換部分老化。解決方法:更換部件。
      ④電路故障。解決方法:調(diào)修電路。
      3) 測(cè)量過(guò)程中,"100 %"點(diǎn)經(jīng)常變動(dòng)?？赡茉?
      ①比色皿在比色皿架中放置的位置不一致，或其表面有液滴。解決方法:用擦鏡紙擦干凈比色皿表面，然后將其安放在比色槽的左邊，上面用定位夾定位。
      ②電路故障(電壓、光電接收、放大電路)。解決方法:送修。
      4)數(shù)顯不穩(wěn)。可能原因:
      ①預(yù)熱時(shí)間不夠。解決方法:延長(zhǎng)預(yù)熱時(shí)間至30分鐘左右(部分儀器由于老化等原因，長(zhǎng)時(shí)間處于工作狀態(tài)時(shí)，也會(huì)工作不穩(wěn))。
      ②光電管內(nèi)的干燥劑失效，使微電流放大器受潮。解決方法:烘烤電路，并更換或烘烤干燥劑。
      ③環(huán)境振動(dòng)過(guò)大、光源附近空氣流速大、外界強(qiáng)光照射等。解決方法:改 善工作環(huán)境。
      ④光電管、電路等其它原因。解決方法:送修。
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